重組蛋白表達實驗中，經(jīng)常會遇到需要表達10kd一下的目的蛋白，常規(guī)的SDS-PAGE若是用來跑小分子蛋白，
會造成模糊不清，膠質(zhì)過軟，甚至跑不出來等情況。
而Tricine膠可以很好的解決10kd以下的小分子蛋白鑒定問題。
Tricine膠比較容易將樣品壓平，跑出來的Marker又細又直。
同樣，顯出來的條帶也壓的很好。
與普通的SDS-PAGE膠跑出來的結(jié)果相比，Marker擴散沒有那么厲害，各泳道條帶間隔明顯，
不像普通膠的條帶容易連到一起。
配方如下：
10×內(nèi)槽電泳液（-極）（Cathode Buffer）1L
Tris-Base 121.1g
Tricine 179.2g
SDS 10g
加水至800ml，用HCl調(diào)整pH至8.25，定容至1L。
本緩沖液是Tricine-SDS-PAGE的內(nèi)槽緩沖液(陰極)。
內(nèi)外槽電泳液的體積置配參考，一般電泳槽內(nèi)槽一次只要200mL液體，而外槽需要400-500mL液體。
傳統(tǒng)實驗手法建議:
制膠時，分離膠做好后加水壓平，一般20min左右凝固。
為了避免樣品漏的問題，可在分離膠凝固后（表現(xiàn)為分層處出現(xiàn)一條清晰的分界線），先不急著把水控干，
而是配置積層膠，先不加APS和TEMED，再空出水（槍頭沿一邊吸盡即可），
再在積層膠里加入APS,TEMED，迅速混勻，先取少量膠液灌入板內(nèi)，輕輕搖晃幾下，潤一遍，棄掉這些膠液，
這時候盡量去干凈，動作要快。再正式灌滿膠液，插上梳齒。
跑電泳時，可以60V先壓約30min，可以看到溴酚藍變的又細又直，待進入分離膠，
可以看到預染的Marker已經(jīng)分離，就可以將電壓調(diào)至120V跑完。
轉(zhuǎn)膜與普通一樣，建議30V恒壓轉(zhuǎn)2小時(用于80KD以下的蛋白分子），如果有更大的蛋白280KD的mTor,
可以2h后再加350mA 30min，效果很好，280KD以下90KD以上的都可以加350mA這一步，時間根據(jù)分子量來定。
90KD加15min即可。
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