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環(huán)己胺丙磺酸CAPS是一種常用的生化原料，可以用作助焊劑、干燥劑、涂料中水性異氰酸酯的固化劑，

在生化行業(yè)，通常作為生物緩沖劑。

根據(jù)其純度和雜質(zhì)含量的不同，應用的行業(yè)也不相同。

從分子結(jié)構(gòu)上看，CAPS是一種環(huán)己烷N-取代的氨基磺酸，分子量221.32，具有兩性，是一種非常好的

生物緩沖劑，pH緩沖范圍9.7-11.1，通常被用作WB實驗蛋白質(zhì)PVDF轉(zhuǎn)膜或硝酸纖維素NC轉(zhuǎn)膜的緩沖液。

【CAS#】 1135-40-6

【分子量】221.32

【分子式】C9H19NO3S

【存儲條件】室溫，避光防潮

 

• Good’s緩沖液

      ②對測定蛋白質(zhì)含量的雙縮脲法和Lowry法不適用，因為它們會使空白管的顏色加深。

 

 

Western Blot 蛋白質(zhì)免疫印記實驗，原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物樣品進行著色，

通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。

 

實驗注意事項如下：

1.SDS-PAGE電泳：與核酸雜交方法類似，只不過被檢測的是蛋白質(zhì)，探針是抗體，顯色用標記的二抗。

一般來說低分子量蛋白用Tri-Glycerine或者Tris-Tricine緩沖體系，高分子量蛋白則用CAPS緩沖系統(tǒng)更好。

緩沖液中的甘氨酸會影響測序，所以現(xiàn)在測序用的轉(zhuǎn)膜緩沖液是10mM/1CAPS10%甲醇。

CAPS電印記緩沖液中的甲醇濃度范圍是0~20%，一般甲醇濃度高的緩沖液對低分子量蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移效果好，

而甲醇濃度低甚至不含甲醇的緩沖液則有利于高分子量蛋白的轉(zhuǎn)移。

2.PVDF膜處理時先放入甲醇浸泡幾秒鐘，再放入CAPS電印記緩沖液，后續(xù)操作須防止膜干涸，如果PVDF膜

變干，需要重復前面步驟。電泳凝膠也需要在CAPS緩沖液中浸泡5-10分鐘，有些強堿性蛋白可不用此步驟。

3.轉(zhuǎn)印條件通常是50V恒壓、100-170mA電流強度，室溫下進行電印記轉(zhuǎn)移，凝膠和PVDF膜之間的氣泡務必

除盡，分子量較高的蛋白注意延長轉(zhuǎn)移時間。

 

4.PVDF膜染色前需取出用去離子水稍微漂洗，用甲醇浸泡，然后用0.1%考馬斯亮藍染色30-50秒，50%甲醇

脫色，去離子水洗滌并晾干即可。

 

 

現(xiàn)在蛋白質(zhì)的PVD轉(zhuǎn)膜已經(jīng)不用Tris-gly、SDS、20%甲醇緩沖液，因為緩沖液中有甘氨酸，

所以測序的時候很難區(qū)分甘氨酸是Buffer帶進去還是蛋白質(zhì)本身的，現(xiàn)在測序用的轉(zhuǎn)膜緩沖液是10mM/1CAPS10%甲醇，

CAPS電印記緩沖液中的甲醇濃度范圍是0~20%，一般甲醇濃度高的緩沖液對低分子量蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移效果好，

而甲醇濃度低甚至不含甲醇的緩沖液則有利于高分子量蛋白的轉(zhuǎn)移。